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關于ATCC細胞的這些內容是你要知道的
點擊次數：419 發布時間：2021-07-05
某些ATCC細胞，是在培養瓶中以活細胞的形式運輸的。這些培養瓶中會接種細胞，孵育并保證細胞能生長，然后補充滿培養基后再運輸。
在收到培養瓶后，目視檢查培養基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變為黃色或紫色），渾濁度，或有無顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養基中是否有微生物污染以及細胞的形態。
如果細胞是單層貼壁生長：
1.無菌操作，取出大約5至10ml的運輸培養基。運輸培養基可以保存在4℃備用。
2.將培養瓶放在產品說明書中推薦的溫度和CO2濃度下培養（大多數細胞系為37℃與5%CO2）直到細胞可以傳代培養。
如果細胞不貼壁或是懸浮狀態生長：
1.在無菌條件下，將培養瓶的全部內容物轉移到離心管中。
2.在125×g轉速下離心5～10 min。
3.取出大約10 ml運輸培養基的上清液，并重懸細胞。將取出的運輸培養基儲存在4℃備用。
4.無菌條件下，轉移懸浮細胞到25 cm2或75 cm2的培養瓶中，培養瓶大小取決于細胞株（見產品說明書）。
5.按照產品說明書中推薦的溫度和CO2濃度培養細胞，直到細胞可以傳代培養。
ATCC細胞株配制注意事項：
1.細胞株經滅菌后，必須放在37C溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。
2.ATCC細胞株一般不需要調pH。對于要調節pH的細胞株，一般用pH試紙測定其pH。如果細胞株偏酸或偏堿時，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞細胞株成分。
3.細胞株在使用時也可以做成不含瓊脂的液體細胞株，用于菌類的震蕩培養。
4.ATCC細胞株也可以加入氯霉素或土霉素，加入量為0.2g/L細胞株，主要是為了抑制細菌的生長，減少干擾性。
ATCC細胞復蘇程序：
1、準備細胞培養容器（如T-75細胞瓶），加入至少10 ml適當的培養基，并平衡溫度及pH。
2、從液氮罐中取出凍存管，并在37℃（或適合該細胞的溫度）水浴中緩慢搖動至冰晶徹底融化（約2 min），注意解凍過程要迅速。
3、從水浴中取出凍存管，浸泡或者噴撒酒精消毒。后續的操作，需在無菌操作臺中，并保證嚴格無菌。
4、擰開凍存管蓋，將細胞懸液轉移至含有9ml完全培養基的無菌離心管中。溫和離心(125g×10min)，棄去上清去除凍存保護劑。注意不要擾動細胞層。加入1-2 ml完全培養基重懸細胞，緩慢吹打使細胞團變松散。將細胞懸液轉移至含培養基的容器中充分混合。
5、24小時后，檢測細胞狀態。
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