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核酸提取時應注意的問題
點擊次數:664 發布時間:2020-08-06
核酸是分子生物學的基礎,而核酸提取是整個分子行業繞不過去的門檻,很多時候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測結果的有效性。
核酸提取被用于許多分子生物化學試驗和診斷,是克隆、轉化、酶切、體外轉錄、擴增、測序等試驗的一個步驟。然而由于細胞內存在大量蛋白質、碳水化合物、原始樣品中的代謝物以及其它污染物,提取高質量的核酸并非易事。適用于各類動植物樣本,包括體液、組織、脫落細胞、血液樣本中核酸的提取提取,提取得到的核酸可直接用于多種下游應用,如RT-PCR,SNP和STR基因分析,電泳等。
核酸提取的原則:
1.保證核酸一級結構的完整性。
2.排除其它分子的污染。
提取時應注意的問題
1.簡化步驟,縮短提取時間
2.減少化學因素對核酸的降解
3.減少物理因素對核酸的降解:機械剪切力和高溫
4.防止核酸的生物降解
核酸提取大致分為3大部分:破碎、提取、純化
儀器一般具有以下的特點:
(1) 無交叉污染:儀器部件未接觸到生物學樣本;
(2) 自動化系統:每次提取工作,操作者只需要做好安裝工作,布置好孔板(提供提取所需要的試劑)。提取整個過程都不需要人為的幫助,儀器自動完成;
(3)提取控制:在提取過程中,如果操作者需要,該系統允許您對提取過程進行控制。
核酸提取的主要步驟包括:①細胞破壁與核酸的釋放;②核酸的分離與純化;③核酸的濃縮、沉淀和洗滌三個主要的步驟。 參考TSU.TW原文:https://www.tsu.tw/edu/9358.html
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