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耐藥細胞株的準備工作有哪些
點擊次數:490 發布時間:2019-09-09
耐藥細胞株通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株(Cell Strain),也就是說,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群.細胞均經過支原體檢測,通過培養法及Hochster染色法進行支原體檢測。
耐藥細胞株準備工作:
準備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試。
耐藥細胞株培養:
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。
耐藥細胞株保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、 -80℃ 冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
耐藥細胞株的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身生物化學過程的改變,細胞膜上出現Pgp(或P-170)糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受。
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