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耐藥細胞株操作流程分享
點擊次數:1419 發布時間:2019-01-10
體內耐藥細胞株的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身生物化學過程的改變,細胞膜上出現Pgp(或P-170)糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受。
耐藥細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株,也就是說,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
耐藥細胞株基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內,核糖體,是蛋白質合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內部的物質運動
耐藥細胞株操作流程:
1、載體構建:將外源基因構建到合適的載體上,如需病毒轉染,則包裝病毒。
2、篩選濃度測定:以14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種:轉染實驗前天接種細胞, 各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和 細胞形狀而定。
4、細胞轉染:用構建好的載體(或包裝好的病毒)轉染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結果。
原代培養物經傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代,或傳代次數有限,可稱為有限細胞系,如可以連續培養,則稱為連續細胞系,培養50代以上并無限培養下去。 所以耐藥細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。耐藥細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。 上一篇 分享激酶細胞株初代培養原理 下一篇 新品上線!基因檢測寵兒“Fusion融合參考品”
耐藥細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株,也就是說,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
耐藥細胞株基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內,核糖體,是蛋白質合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內部的物質運動
耐藥細胞株操作流程:
1、載體構建:將外源基因構建到合適的載體上,如需病毒轉染,則包裝病毒。
2、篩選濃度測定:以14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種:轉染實驗前天接種細胞, 各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和 細胞形狀而定。
4、細胞轉染:用構建好的載體(或包裝好的病毒)轉染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結果。
原代培養物經傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代,或傳代次數有限,可稱為有限細胞系,如可以連續培養,則稱為連續細胞系,培養50代以上并無限培養下去。 所以耐藥細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。耐藥細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。 上一篇 分享激酶細胞株初代培養原理 下一篇 新品上線!基因檢測寵兒“Fusion融合參考品”