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凍存ATCC細胞的復蘇和培養
點擊次數:1008 發布時間:2018-06-07
ATCC細胞密度超過90%,并且細胞狀態很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代(傳代的比例應依據不同的細胞而定),狀態穩定,便于穩定生長。
凍存ATCC細胞的復蘇和培養:
1.先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。(請參閱:*注1)
2.小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛融化,就應將ATCC細胞凍存管取出水浴。
3.在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
4.小心擰開凍存管的頂部,將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的完全培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC有各個細胞株的具體生長狀況及培養方法記載。
ATCC細胞如何運輸?收到細胞后如何處理?
ATCC細胞通常保存在凍存管中用干冰運輸,或是在培養瓶中常溫運輸。但對于中國客戶,由于運輸時間稍長,都是采用干冰運輸的方式。
在收到凍存細胞后,很重要的一點是迅速解凍使其立即復蘇并除去DMSO,然后將它們放置到培養基中。如果做不到上面這點,需將ATCC細胞存儲在液氮中(-130℃以下)。不要將凍存ATCC細胞儲存在高于-130℃的溫度下,這會使細胞存活率迅速下降。 上一篇 腫瘤細胞株培養小技巧 下一篇 超實用!一些實用的用于免疫組化分析的手機應用程序
凍存ATCC細胞的復蘇和培養:
1.先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。(請參閱:*注1)
2.小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛融化,就應將ATCC細胞凍存管取出水浴。
3.在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
4.小心擰開凍存管的頂部,將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的完全培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC有各個細胞株的具體生長狀況及培養方法記載。
ATCC細胞如何運輸?收到細胞后如何處理?
ATCC細胞通常保存在凍存管中用干冰運輸,或是在培養瓶中常溫運輸。但對于中國客戶,由于運輸時間稍長,都是采用干冰運輸的方式。
在收到凍存細胞后,很重要的一點是迅速解凍使其立即復蘇并除去DMSO,然后將它們放置到培養基中。如果做不到上面這點,需將ATCC細胞存儲在液氮中(-130℃以下)。不要將凍存ATCC細胞儲存在高于-130℃的溫度下,這會使細胞存活率迅速下降。 上一篇 腫瘤細胞株培養小技巧 下一篇 超實用!一些實用的用于免疫組化分析的手機應用程序