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耐藥細胞株的細胞凍存與復蘇原理
點擊次數:764 發布時間:2018-04-03
耐藥細胞株的細胞凍存與復蘇原理:
在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細胞復蘇時速度要快,使之迅速通過細胞zui易受損的-5~0℃,細胞仍能生長,活力受損不大。
目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。
耐藥細胞株細胞特點:
1.傳代情況:P2
2.活性好、穩定性高、適應性強,易培養
3.傳代快、多:2-3天傳一代,普通可傳10代以上 腫瘤細胞無限制
4.純度高達95% 無污染和其他雜細胞
5.有技術疑問可以提供一對一的解答:專業,及時,耐心
6.貨期短,一般凍存管5-7個工作日,復蘇7-15個工作日。
耐藥細胞株前期需要準備:
*構建好的外源基因載體
*待轉染的細胞系(1×106個細胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細胞培養條件的說明
*若需要檢測靶基因的表達變化,請提供相應抗體
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