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穩定細胞株的服務流程是怎么樣的？
點擊次數：571 發布時間：2020-08-13
穩定細胞株是人為的將目的基因或感興趣的片段整合到宿主細胞的基因組，可以穩定的傳代不會降解丟失的細胞，適合穩定大量表達各種外源蛋白。其一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標志進行篩選，篩選得到可穩定表達目的蛋白的細胞株。
穩定細胞株指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。它的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因。其包括多克隆穩定細胞株和單克隆穩定細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經細胞克隆挑選得到的，由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統一，傳代過程中細胞的基因表達保持穩定。
穩定細胞株服務流程：
a、載體構建：將外源基因構建到合適的載體上。
b、細胞篩選濃度測定：以10-14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞應達到60%-80%覆蓋。
d、細胞轉染：用構建好的載體轉染目的細胞。
e、使用抗生素對細胞進行篩選。
f、篩選結果鑒定。
穩定細胞株應用：
穩定持續地生產目的蛋白
構建符合法規要求的無血清培養細胞株
表達具有活性的大分子量多聚體蛋白，此類蛋白通常需要復雜的翻譯后修飾，如糖基化和二硫鍵連接等
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